疫情持续到现在,相信大家对核酸检测都不陌生了,大部分人都经历过核酸检测。
那么,为什么通过核酸检测可以确定人体是否携带病毒呢?
核酸检测的原理是什么呢?
核酸检测阳性就代表确诊新冠肺炎了吗?
为什么会有假阴性或假阳性的结果呢?
今天,我们来聊一聊关于核酸检测的那些知识!
一、 核酸检测的原理是什么?
核酸,就是遗传物质,包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。根据遗传物质的不同,可以将病毒分为DNA病毒和RNA病毒,而新冠病毒就是RNA病毒的一种。所以,核酸检测就是通过检测受试者体内是不是有新冠病毒的RNA来确定他是否携带病毒。
目前使用的检测技术是荧光定量RT-PCR技术。具体步骤如下:
1、提取病毒RNA。
把核酸提取裂解液加入到采集的样本中,就可以破坏病毒的结构,释放RNA。
2、将RNA反转录为cDNA。
因为RNA都是单链结构,十分不稳定,不利于检测,所以要利用反转录技术(RT),用试剂盒中的反转录酶将它反转录为更稳定的DNA双链结构。
3、扩充cDNA。
目的是将上个步骤中得到的cDNA进行扩充,也就是增加它的数量,用到的技术是聚合酶链式反应(PCR)。在扩充的同时,荧光探针也会一起工作。荧光探针的任务是与新产生的cDNA序列进行结合,使cDNA序列带上荧光信号而能被检测仪识别出来。
4、检测、出结果。
PCR检测仪可以记录荧光信号的Ct值。只要新增加一条DNA序列,Ct值就会增加一点。所以,如果样本中带有新冠病毒,最终显示出来的Ct值是一条上升的S型曲线,就诊断为核酸检测阳性患者。反之,没有上升的曲线就是阴性。
二、 核酸检测的采样样本有哪些?
大家接触最多的应该就是口咽拭子和鼻咽拭子这两种核酸检测方式,但是,口咽部或鼻咽部的样本并不是最佳的采样样本。
这是因为,从病毒载量上来看,只有肺里面的载量是最高的,而口咽部或鼻咽部上的病毒是患者呼吸或者咳嗽时带上来的,可能载量比较小,会影响到核酸检测结果的准确性。
所以,肺泡上皮细胞是最好的样本,其次是气道上皮细胞,最后是成纤维细胞、内皮细胞和巨噬细胞等血液中的细胞。
从样本类型来看的话,从最佳到最次的样本顺序为:肺泡灌洗液、深痰、鼻咽拭子、口咽拭子、血液。我们国家还增加了肛拭子这个种类,是因为粪便中也可以检测到病毒,并且比鼻咽拭子和口咽拭子的准确率更高。
但是,由于口咽拭子和鼻咽拭子采样是最方便的,所以一般采用这两种采样方式。
三、 确诊新冠肺炎需要哪些检查结果?
1、核酸检测结果为阳性
核酸检测是新冠肺炎的确诊金标准。也就是说,只有核酸检测的结果呈现阳性,才能考虑确诊新冠肺炎。但是,尽管是金标准,结果也不是100%正确的,还是受到各种客观和主观因素的影响。这也是我们经常能看到假阴性和假阳性病例新闻的原因。
2、典型临床症状
除了核酸检测结果呈阳性外,新冠肺炎的确诊还需要典型的临床症状。
患者最典型的症状就是发热和咳嗽,除此之外,可能还有咽喉疼痛、呼吸不畅等。肺部CT的典型症状为磨玻璃影、斑片影和实变影。
具备以上两点,才能确诊新冠肺炎。
四、 为什么会有假阴性结果?
自从新冠肺炎发生后,核酸检测假阴性的事件常有发生,给疫情的防控带来了极大的阻碍,假阴性的结果是技术上的缺陷吗?为什么没有办法消除呢?
假阴性就是指某个阳性患者的检测结果呈阴性。包括:多次阴性核酸检测结果后检出阳性结果、多次咽拭子检测为阴性,但肺泡灌洗液检测为阳性、核酸检测呈阴性但CT影像显示新冠肺炎的特征。
假阴性的出现和以下几个方面有关:
1、样本病毒载量低。
采样部位、采样力度和深度、采样时间点都会影响到采样时能取到的病毒载量。
首先,前面也提到过,尽管咽拭子是最方便的采样方式,但它其实并不是最佳的采样部位。如果患者的症状比较轻微,体内病毒少,且在核酸检测前喝过水或者吃过东西,很可能会把咽壁上的病毒冲下去,导致采样时能采到的病毒载量十分有限,可能出现假阴性结果。
其次,如果核酸检测的采样人员在采咽拭子的样子时,刮取的力度较小,或者深度不够,也可能会导致样本病毒载量过小。所以,如果去做核酸检测时,觉得采样人员有些太用力,或者太深,造成了被采样人员的不适感,请给予理解,他们也是为了结果尽可能准确,减小误差的发生。
最后,病毒载量也和患者的病程有关系。如果患者处于感染初期,或者已经快康复了,这时,他体内的病毒量都是相对较少的,就有可能造成假阴性。这也是有一些阳性患者转阴后又复阳的原因。
2、检测试剂的质量问题。
像诊断试剂的灵敏度、核酸提取效率和纯度、病毒变异等因素,都会影响到最终的结果。
五、核酸检测阳性=确诊?
核酸检测呈阳性,有3种可能性:假阳性、无症状感染者、确诊新冠肺炎。
1、为什么会有假阳性?
假阳性就是阴性患者的结果错为阳性。
假阳性结果的出现基本上是因为样本在检测过程中被污染了。也有可能是因为打了疫苗之后出现了假阳性的结果。
2、无症状感染者和确诊患者有什么区别?
前面也提到了,新冠肺炎的确诊不仅需要核酸检测的结果之外,还需要临床症状的支持。
所以,这两类人群的区别就是,是否出现了临床症状。
无症状感染者只是核酸检测为阳性,但并没有咳嗽、发热或CT影像学特征等临床症状,表明感染程度较轻。
而确诊患者,既核酸检测为阳性,也出现了新冠肺炎的典型临床症状。
但是,这两类人群都是新冠肺炎的感染者,都具有传播能力,所以需要集中隔离。